Plasmide CRISPR d'Activation (h) EMSY: sc-405722-ACT

EMSY code une protéine nucléaire associée à la chromatine qui se lie à BRCA2 et participe à la régulation des réponses aux dommages de l’ADN, au contrôle transcriptionnel et au maintien de la stabilité du génome. Grâce à ses interactions avec des facteurs de remodelage de la chromatine et de réparation, EMSY peut influencer la compétence en recombinaison homologue, la signalisation du stress de réplication et la coordination des points de contrôle du cycle cellulaire. Des altérations de l’expression d’EMSY ou de son nombre de copies ont été associées à une dérégulation de la capacité de réparation de l’ADN et à des programmes transcriptionnels favorisant des phénotypes oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux. De ce fait, EMSY est fréquemment étudié dans des voies reliant la dynamique de la chromatine, la biologie de la réparation associée à BRCA2 et des mécanismes pathologiques induits par l’instabilité génomique.

EMSY Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EMSY sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EMSY Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EMSY dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EMSY, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EMSY. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EMSY natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EMSY au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EMSY dans les cellules tumorales présentant une expression de EMSY silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.