EMP-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-407036-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EMP-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EMP-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und EMP-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EMP3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EMP-3: sc-81797
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EMP-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EMP-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EMP3 kodiert das epitheliale Membranprotein 3 (EMP-3), ein tetraspanähnliches Membranglykoprotein, das an der Regulation von Zell‑Zell‑Interaktionen, der Membranorganisation und der Signalübertragung an der Plasmamembran beteiligt ist. In menschlichen Zellen wird EMP-3 mit der Modulation rezeptorvermittelter Signalwege in Verbindung gebracht, darunter EGFR/PI3K–AKT‑ und MAPK‑Signalgebung, wodurch Proliferation, Überleben und Migrationsverhalten beeinflusst werden. Veränderungen der Expression und genomische Alterationen von EMP3 wurden in zahlreichen Tumorentitäten sowie in neurologischen Kontexten beschrieben und mit Prozessen wie Differenzierung, Invasion und Reaktionen auf das Mikroumfeld verknüpft. Als oberflächenassoziierter Faktor wird EMP-3 häufig im Hinblick auf seine Auswirkungen auf Signaldynamik, Trafficking und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme untersucht, die für die Krankheitsbiologie relevant sind.
EMP-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EMP3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EMP3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EMP3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EMP3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.