Plásmido CRISPR de Activación (m) EMP-1: sc-420165-ACT

El gen Emp1 de ratón codifica la proteína de membrana epitelial 1 (EMP-1), una proteína tetraspan asociada a la membrana implicada en la regulación de la adhesión célula–célula, la diferenciación epitelial y la señalización relacionada con la función de barrera. EMP-1 se ha asociado con la modulación de la señalización de receptores y de la organización del citoesqueleto, que influyen en la proliferación, la migración y las respuestas al estrés, con funciones dependientes del contexto en la homeostasis tisular. Se han descrito patrones alterados de expresión de EMP1 en contextos inflamatorios y fibróticos, así como en múltiples fenotipos asociados al cáncer, donde puede correlacionarse con cambios en la invasividad y la plasticidad celular. Estas características hacen de Emp1 un nodo útil para estudiar programas de señalización cercanos a la membrana que acoplan señales extracelulares con resultados transcripcionales y fenotípicos.

EMP-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Emp1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EMP-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Emp1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Emp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EMP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Emp1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EMP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EMP-1 en células tumorales con expresión de Emp1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.