EMP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403122-ACT

Das epitheliale Membranprotein 1 (EMP1; EMP-1) ist ein tetraspanes, membranassoziiertes Glykoprotein, das an der epithelialen Differenzierung, der Regulation von Zell-Zell-Kontakten und dem Remodeling von Adhäsionssignalen beteiligt ist. In menschlichen Geweben wurde die EMP1-Expression mit der Modulation proliferativer und migratorischer Phänotypen in Verbindung gebracht, über Signalwege, die mit der Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalgebung, der MAPK/ERK-Aktivität und der Organisation des Zytoskeletts verknüpft sind. Veränderte EMP1-Spiegel wurden in zahlreichen Tumorentitäten sowie in entzündlichen Kontexten beschrieben, wo sie mit Änderungen der Invasivität, EMT-assoziierten Programmen und Reaktionen des Mikromilieus assoziiert sind. Diese Eigenschaften machen EMP1 zu einem nützlichen Ziel, um membrannahe Signalnetzwerke, stressadaptive transkriptionelle Programme und Phänotypwechsel in krankheitsrelevanten Zellmodellen zu untersuchen.

EMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EMP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EMP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EMP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EMP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EMP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EMP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EMP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EMP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.