ELOVL4 Double Nickase Plasmid (h): sc-407562-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ELOVL4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ELOVL4 Double-Nickase-Plasmid (h) und ELOVL4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ELOVL4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ELOVL4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407562-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ELOVL4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407562-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELOVL4 kodiert eine im endoplasmatischen Retikulum lokalisierte Elongase, die die Synthese sehr langkettiger Fettsäuren katalysiert, einschließlich von Substraten, die für spezialisierte Lipide wie retinale und epidermale Lipide benötigt werden. Durch die Verlängerung langkettiger Acyl-CoAs trägt ELOVL4 zur Lipidhomöostase, zur Membranzusammensetzung und zur Barrierefunktion bei und beeinflusst Signal- und Stoffwechselwege, die mit dem Sphingolipid- und Phospholipidstoffwechsel verknüpft sind. Eine Störung der ELOVL4-Aktivität verändert die Pools sehr langkettiger Lipide und wurde mit Phänotypen erblicher retinaler Degeneration sowie neurokutanen Erkrankungen in Zusammenhang gebracht, was die Bedeutung des Gens für die Integrität der Photorezeptoren und die Hautphysiologie unterstreicht. Als metabolischer Knotenpunkt an der Schnittstelle zwischen Fettsäureelongation und lipidischem Organellen-Remodeling wird ELOVL4 häufig in Kontexten von Lipidstress, Membranbiophysik und gewebespezifischen Lipidanforderungen untersucht.
ELOVL4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ELOVL4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ELOVL4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ELOVL4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ELOVL4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.