ELL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420159

Übersicht

Ell kodiert ELL, einen Elongationsfaktor der RNA-Polymerase II, der prozessive Transkription fördert, indem er das Pausieren der Polymerase begrenzt und die produktive mRNA-Synthese unterstützt. ELL ist an transkriptionellen Regulationskomplexen beteiligt, die die Elongation mit dem Chromatinkontext und der RNA-Prozessierung koordinieren und dadurch Genexpressionsprogramme beeinflussen, die mit Zellidentität und Proliferation verknüpft sind. Eine Störung der ELL-abhängigen Elongation kann die Transkriptionsfidelität und Stressantwort-Signalwege verändern, was ELL für die Untersuchung von Mechanismen relevant macht, die einer fehlregulierten Genexpression in krebsassoziierten Transkriptionsnetzwerken zugrunde liegen. In Mausmodellen bietet Ell einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um die Kontrolle der Elongation über die Entwicklung hinweg, die hämatopoetische Regulation und die genomweiten Transkriptionsdynamiken zu untersuchen.

Das ELL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ell-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ell-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ell nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ELL-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ell-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ELL-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ell-Exone abzielen, die für die ELL-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ell-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ELL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ELL CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ell-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ELL HDR-Plasmid (m) und ELL HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ell-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ell-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.