Plásmido CRISPR de Activación (h) Elk-1: sc-400385-ACT

ELK1 codifica Elk-1, un factor de transcripción con dominio ETS que actúa como efector nuclear de la señalización activada por mitógenos, de forma especialmente destacada aguas abajo de ERK/MAPK. Tras su fosforilación, Elk-1 coopera con el factor de respuesta al suero (SRF) en los elementos de respuesta al suero para regular programas de transcripción de genes de respuesta inmediata temprana que controlan la proliferación, la diferenciación, la plasticidad sináptica y las respuestas al estrés celular. La actividad de ELK1 integra señales procedentes de receptores de factores de crecimiento y de otras vías de quinasas para moldear salidas transcripcionales específicas del contexto, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la regulación génica dependiente de señales. La desregulación de la señalización de Elk-1 y de la expresión de sus genes diana se ha implicado en programas transcripcionales oncogénicos y en fenotipos relacionados con la neurobiología, lo que respalda su relevancia en el modelado mecanístico de enfermedades.

Elk-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ELK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Elk-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ELK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ELK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Elk-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ELK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Elk-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Elk-1 en células tumorales con expresión de ELK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.