Plasmide CRISPR d'Activation (h) elafin: sc-401832-ACT

PI3 code pour l’élafine, un inhibiteur de protéases à sérine sécrété (également appelé inhibiteur de peptidases 3) qui freine l’élastase des neutrophiles et des protéases apparentées afin de préserver l’intégrité de la barrière épithéliale lors de l’inflammation. L’élafine participe à l’immunité innée des muqueuses et au remodelage tissulaire en limitant la dégradation de la matrice extracellulaire induite par les protéases et en modulant des microenvironnements riches en cytokines. Son expression est régulée de manière dynamique en réponse à des signaux inflammatoires dans les épithéliums des voies aériennes, de la peau et du tractus gastro-intestinal, reliant PI3 à des processus tels que la réparation des plaies et la défense de l’hôte. Des niveaux dérégulés de PI3/élafine ont été associés à des affections inflammatoires chroniques et au déséquilibre protéases–antiprotéases observé dans de multiples contextes de maladies épithéliales, ce qui étaye son utilisation comme marqueur mécanistique en recherche en immunologie et en biologie des barrières.

elafin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PI3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

elafin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PI3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PI3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de elafin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PI3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de elafin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie elafin dans les cellules tumorales présentant une expression de PI3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.