Plasmide Double Nickase (h) eIF5A: sc-401820-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) eIF5A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide eIF5A Double Nickase (h) et le plasmide eIF5A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EIF5A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) eIF5A | sc-401820-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) eIF5A | sc-401820-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF5A code pour le facteur d’initiation de la traduction eucaryote 5A (eIF5A), une protéine de liaison à l’ARN hautement conservée, activée par hypusination, qui favorise un allongement efficace de la traduction, en particulier au travers de motifs riches en polyproline. eIF5A influence le devenir des ARNm et la dynamique des ribosomes, ce qui la relie à la protéostasie, à la progression du cycle cellulaire et aux programmes d’adaptation au stress. Par ces fonctions, EIF5A participe à des voies qui modulent la prolifération, l’apoptose et les sorties de signalisation inflammatoire. Une dérégulation de l’activité d’eIF5A ou de la machinerie d’hypusination a été associée à des altérations du contrôle de la croissance et à un remodelage translationnel observés dans divers contextes de cancer ainsi que dans d’autres maladies prolifératives ou liées au stress.
eIF5A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EIF5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EIF5A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EIF5A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EIF5A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.