eIF5A Plasmide Double Nickase (h): sc-401820-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF5A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF5A Double Nickase Plasmid (h) e il eIF5A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF5A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF5A Plasmide Double Nickase (h) | sc-401820-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF5A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401820-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF5A codifica il fattore di inizio della traduzione eucariotico 5A (eIF5A), una proteina legante l’RNA altamente conservata che viene attivata tramite ipusinazione e sostiene un allungamento della traduzione efficiente, in particolare attraverso motivi ricchi di poliprolina. eIF5A influenza il turnover dell’mRNA e la dinamica dei ribosomi, collegandosi alla proteostasi, alla progressione del ciclo cellulare e ai programmi adattativi allo stress. Attraverso queste funzioni, EIF5A partecipa a vie che modulano la proliferazione, l’apoptosi e gli output della segnalazione infiammatoria. La disregolazione dell’attività di eIF5A o del circuito di ipusinazione è stata associata ad alterazioni del controllo della crescita e a rimodellamenti della traduzione osservati nel cancro e in altri contesti patologici proliferativi o legati allo stress.
eIF5A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF5A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF5A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF5A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF5A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.