Plásmido Doble Nickase (h) eIF4AII: sc-402758-NIC

EIF4A2 codifica eIF4AII, una helicasa de ARN tipo DEAD-box que actúa dentro del complejo de iniciación de la traducción eIF4F para desenrollar UTR 5′ estructuradas y favorecer el reclutamiento de ribosomas. Al regular la traducción dependiente del cap, eIF4AII influye en la producción del proteoma durante el crecimiento, las respuestas al estrés y la progresión del ciclo celular, y se integra con vías del metabolismo del ARN que controlan la estabilidad del ARNm y la eficiencia traduccional. El control alterado de la iniciación de la traducción se asocia con señalización desregulada y con la proteostasis, lo que convierte a EIF4A2 en un nodo útil para estudiar programas de traducción oncogénicos y vulnerabilidades dependientes del ARN. La actividad de eIF4AII también es relevante en contextos en los que la traducción selectiva de transcritos estructurados determina la diferenciación y la expresión génica adaptativa al estrés.

eIF4AII El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF4A2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF4A2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF4A2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF4A2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.