Plasmide CRISPR d'Activation (h) eIF3η: sc-400817-ACT

EIF3B code pour la sous-unité eta du facteur d’initiation de la traduction eucaryote 3 (eIF3η), un composant central du complexe eIF3 qui coordonne l’assemblage du complexe de pré‑initiation 43S et favorise le recrutement des ARNm sur la sous-unité ribosomique 40S. En régulant l’initiation de la traduction, EIF3B influence le remodelage du protéome lors de la croissance cellulaire, des réponses au stress et de la progression du cycle cellulaire, et il intègre des signaux qui modulent la synthèse protéique globale ainsi que celle sélective de certains transcrits. Une dérégulation du contrôle de la traduction impliquant des sous-unités d’eIF3 a été associée à des programmes de prolifération altérés et à la transformation cellulaire, ce qui fait d’EIF3B un point d’entrée pertinent pour étudier le chargement des ribosomes, la sélectivité des ARNm et la protéostase. Les chercheurs étudient couramment EIF3B pour relier des modifications de la fonction des facteurs d’initiation à des changements, à l’échelle des voies, des sorties d’expression génique.

eIF3η Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EIF3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

eIF3η Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EIF3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EIF3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de eIF3η. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EIF3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de eIF3η au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie eIF3η dans les cellules tumorales présentant une expression de EIF3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.