eIF2α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400199
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- eIF2α Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im eIF2α-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: eIF2α: sc-133132
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eIF2α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-400199 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
EIF2S1 kodiert die alpha-Untereinheit des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktors 2 (eIF2α), einen zentralen Regulator der cap-abhängigen Translationsinitiation und der Proteostase. Die Phosphorylierung von eIF2α an Ser51 integriert Signale mehrerer stresssensitiver Kinasen (PERK/EIF2AK3, GCN2/EIF2AK4, PKR/EIF2AK2 und HRI/EIF2AK1), um die Verfügbarkeit des ternären Komplexes zu modulieren, die globale Proteinsynthese zu drosseln und selektive Translationsprogramme wie ATF4 im Rahmen der integrierten Stressantwort (ISR) zu fördern. Über diesen Signalweg verknüpft eIF2α Stress des endoplasmatischen Retikulums, Aminosäuremangel, Viruserkennung und oxidativen Stress mit adaptiven transkriptionellen und translationalen Umprogrammierungen. Eine fehlregulierte eIF2α-Signalgebung wird mit der Stresstoleranz von Krebszellen, neurodegenerativen Phänotypen mit Proteinaggregation sowie metabolischen und entzündlichen Zuständen in Zusammenhang gebracht – über veränderte Translationskontrolle und die Dynamik von Stressgranula.
Das eIF2α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EIF2S1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EIF2S1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EIF2S1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die eIF2α-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EIF2S1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der eIF2α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf EIF2S1-Exone abzielen, die für die eIF2α-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere EIF2S1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom eIF2α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom eIF2α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EIF2S1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das eIF2α HDR-Plasmid (h) und eIF2α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EIF2S1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EIF2S1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.