eIF1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403809

Übersicht

EIF1B kodiert den eukaryotischen Translationsinitiationsfaktor 1B (eIF1B), einen kleinen Initiationsfaktor, der an frühen Schritten der cap-abhängigen Translationsinitiation und an der Auswahl des Startcodons beteiligt ist, indem er die Dynamik des 40S-ribosomalen Präinitiationskomplexes reguliert. Durch die Beeinflussung von Scanning und Initiationsgenauigkeit trägt eIF1B zur Homöostase des Proteoms sowie zur zellulären Antwort auf Wachstumssignale und Stress bei, die die globale Proteinsynthese modulieren. Störungen in Netzwerken von Translationsinitiationsfaktoren werden häufig mit veränderten Programmen der Zellproliferation und mit Stressadaptationswegen in Verbindung gebracht – Prozesse, die in der Krebsbiologie und der neuroentwicklungsbezogenen Forschung häufig untersucht werden. EIF1B ist daher relevant für mechanistische Studien, die die translationale Kontrolle mit einer Umprogrammierung der Genexpression in menschlichen Zellen verknüpfen.

Das eIF1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EIF1B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EIF1B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EIF1B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die eIF1B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EIF1B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der eIF1B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EIF1B-Exone abzielen, die für die eIF1B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EIF1B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom eIF1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom eIF1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EIF1B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das eIF1B HDR-Plasmid (h) und eIF1B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EIF1B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EIF1B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.