eIF1B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403809

Panoramica

EIF1B codifica il fattore di inizio della traduzione eucariotica 1B (eIF1B), un piccolo fattore di inizio coinvolto nelle fasi precoci dell’avvio della traduzione cap-dipendente e nella selezione del codone di inizio, attraverso la regolazione della dinamica del complesso di pre-inizio ribosomiale 40S. Influenzando lo scanning e la fedeltà dell’inizio, eIF1B contribuisce all’omeostasi del proteoma e alla risposta cellulare a segnali di crescita e stress che modulano la sintesi proteica globale. L’alterazione delle reti dei fattori di inizio della traduzione è spesso associata a programmi di proliferazione cellulare modificati e a vie di adattamento allo stress, processi comunemente studiati nella biologia del cancro e nella ricerca sul neurosviluppo. EIF1B è quindi rilevante per studi meccanicistici che collegano il controllo traduzionale al rimodellamento dell’espressione genica nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF1B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EIF1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EIF1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EIF1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF1B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EIF1B per lo studio della segnalazione di eIF1B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EIF1B critici per la funzione di eIF1B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EIF1B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eIF1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal eIF1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EIF1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eIF1B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR eIF1B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EIF1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EIF1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.