eIF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423216

Descripción general

El gen Eif1 de ratón codifica el factor de iniciación de la traducción eucariota 1 (eIF1), un componente conservado del complejo de preiniciación 43S que favorece una selección precisa del codón de inicio durante la iniciación de la traducción dependiente de cap. Al imponer mayor rigurosidad durante el escaneo y estabilizar una conformación abierta de la subunidad 40S, eIF1 ayuda a controlar la síntesis global de proteínas y la fidelidad del proteoma. Esta función vincula a Eif1 con programas de control traduccional que moldean el crecimiento celular, la adaptación al estrés y la diferenciación mediante una iniciación selectiva según el ARNm. La alteración de la fidelidad en la iniciación de la traducción es ampliamente relevante para estados asociados a enfermedad, caracterizados por cambios en la proteostasis y señalización de crecimiento aberrante, lo que convierte a Eif1 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la desregulación de la traducción.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO eIF1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eif1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eif1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eif1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eIF1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eif1 para la investigación de la señalización de eIF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Eif1 críticos para la función de eIF1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eif1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido eIF1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido eIF1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eif1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eIF1 (m) y el plásmido HDR eIF1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eif1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eif1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.