EFP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402678

Übersicht

TRIM25 kodiert die E3-Ubiquitin-Ligase EFP, ein Protein der TRIM-Familie, das Ubiquitinierungsereignisse katalysiert, welche die angeborene Immun-Signalgebung und den RNA-Stoffwechsel steuern. EFP fördert antivirale Antworten, indem es RIG-I ubiquitiniert und aktiviert, die nachgeschaltete Typ-I-Interferon-Signalgebung über MAVS, TBK1 und IRF3/7 erleichtert und NF-κB-assoziierte entzündliche Effekte modulieren kann. Über die Wirtsabwehr hinaus ist TRIM25 an der posttranskriptionellen Regulation beteiligt, unter anderem durch Interaktionen mit RNA-bindenden Proteinen, und beeinflusst Programme des Zellzyklus sowie der Stressantwort. Eine dysregulierte TRIM25-Aktivität wurde mit einem veränderten Interferon-Grundtonus, erhöhter Virusanfälligkeit und kontextabhängigen Rollen in der Tumorbiologie und endokrinen Signalgebung in Verbindung gebracht, was TRIM25 zu einem relevanten Knotenpunkt in der Entzündungs- und Krebsforschung macht.

Das EFP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TRIM25-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TRIM25-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TRIM25 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EFP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TRIM25-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EFP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TRIM25-Exone abzielen, die für die EFP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TRIM25-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EFP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EFP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TRIM25-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EFP HDR-Plasmid (h) und EFP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TRIM25-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TRIM25-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.