EF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420117

Übersicht

Eef2 kodiert den eukaryotischen Elongationsfaktor 2 (EF-2), eine konservierte GTPase, die während der Elongation der mRNA-Translation die ribosomale Translokation antreibt und damit die globalen Raten der Proteinsynthese steuert. Die Aktivität von EF-2 wird streng durch Phosphorylierung über die eEF2-Kinase reguliert, die nachgeschaltet an Nährstoff- und Stress-Signalwegen wirkt, einschließlich der mTOR-Signalkaskade, und so die Translationsleistung mit dem Energiestatus, Hypoxie und synaptischer Aktivität verknüpft. Über seine zentrale Rolle in der Proteostase beeinflusst EF-2 Zellwachstum, Stressantworten und Differenzierungsprogramme, die von einer schnellen Umgestaltung des Proteoms abhängen. Eine fehlregulierte Translationskontrolle unter Beteiligung von EF-2 und eEF2K wurde mit neurologischen Funktionsstörungen und tumorassoziierter metabolischer Anpassung in Verbindung gebracht, wodurch Eef2 einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Translationsregulation in Mausmodellen darstellt.

Das EF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Eef2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Eef2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Eef2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EF-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Eef2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EF-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Eef2-Exone abzielen, die für die EF-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Eef2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom EF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Eef2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EF-2 HDR-Plasmid (m) und EF-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Eef2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Eef2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.