Plásmido CRISPR de Activación (h) EED: sc-401234-ACT

EED (desarrollo del ectodermo embrionario) codifica un componente central del complejo represor de Polycomb 2 (PRC2) que se une a H3K27me3 y estimula alostéricamente la actividad metiltransferasa de EZH2/EZH1, reforzando la heterocromatina facultativa y el silenciamiento transcripcional estable. Mediante la regulación epigenética dependiente de PRC2, EED contribuye a la especificación de linajes, el control del ciclo celular y el mantenimiento de la identidad celular al coordinar la compactación de la cromatina y la represión de reguladores del desarrollo. La función desregulada de EED–PRC2 se asocia con alteraciones generalizadas en los paisajes de metilación de H3K27, programas de expresión génica aberrantes y fenotipos oncogénicos o del desarrollo en múltiples contextos. En consecuencia, EED se estudia con frecuencia en biología de la cromatina, modelos de diferenciación y análisis a nivel de vías de la represión génica mediada por Polycomb.

EED El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EED sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EED El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EED en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EED, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EED. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EED y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EED en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EED en células tumorales con expresión de EED silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.