ECHS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-406053-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ECHS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ECHS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ECHS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ECHS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ECHS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406053-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ECHS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406053-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ECHS1 kodiert die kurzkettige Enoyl‑CoA‑Hydratase 1, ein Enzym der mitochondrialen Matrix, das während der β‑Oxidation von Fettsäuren die Hydratisierung von trans‑2‑Enoyl‑CoA‑Zwischenprodukten katalysiert und zur Verstoffwechselung verzweigtkettiger Aminosäuren beiträgt. Durch die Unterstützung der Acetyl‑CoA‑Bildung und des mitochondrialen Energiestoffwechsels beeinflusst ECHS1 das Redoxgleichgewicht sowie den Umgang mit lipidgeleiteten Substraten unter metabolischem Stress. Eine Störung der ECHS1‑Aktivität wurde mit mitochondrialer Dysfunktion und angeborenen Stoffwechselstörungen mit neurometabolischen Manifestationen in Verbindung gebracht und ist damit relevant für Studien zur Kopplung der oxidativen Phosphorylierung, zur Metabolitenakkumulation und zur zellulären Bioenergetik. ECHS1 ist daher ein nützliches Ziel, um das Zusammenspiel mitochondrialer Signalwege mit Stresssignalgebung, Lipidstoffwechsel und metabolischer Umprogrammierung in humanen Zellen zu untersuchen.
ECHS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ECHS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ECHS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ECHS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ECHS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.