Plasmide Double Nickase (h) Ebi2: sc-405397-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Ebi2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ebi2 Double Nickase (h) et le plasmide Ebi2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR183. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ebi2 Antibody (G-12): sc-514342
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Ebi2 | sc-405397-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Ebi2 | sc-405397-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR183 code pour EBI2 (également appelé GPR183), un récepteur couplé aux protéines G qui détecte des oxystérols tels que le 7α,25‑dihydroxycholestérol afin d’orienter le positionnement des cellules immunitaires. La signalisation d’EBI2 coordonne les réponses chimiotactiques et contribue à l’organisation des tissus lymphoïdes en déterminant la localisation des lymphocytes B et des cellules dendritiques au sein des follicules et des régions interfolliculaires. Par l’intermédiaire de voies dépendantes des GPCR, notamment une signalisation dépendante de Gαi, il influence la migration, les états d’activation et les interactions induites par l’antigène qui sont au cœur de l’immunité humorale. Une activité dérégulée de GPR183 a été impliquée dans des contextes inflammatoires et auto-immuns et a été explorée dans le remodelage immunitaire lié aux infections, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le trafic des cellules immunitaires et la biologie des oxystérols.
Ebi2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR183 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR183. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR183. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR183.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.