EBF1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401258-ACT

EBF1 (early B-cell factor 1) ist ein linienbestimmender Transkriptionsfaktor, der die Chromatinzugänglichkeit und Genexpressionsprogramme reguliert, die für die Festlegung auf die B‑Zell-Linie, die Differenzierung und die Homöostase des Immunsystems erforderlich sind. In hämatopoetischen Zellen kooperiert EBF1 mit Faktoren wie PAX5 und E2A, um transkriptionelle Netzwerke zu koordinieren, die die V(D)J‑Rekombination, die Signalgebungskompetenz des B‑Zell‑Rezeptors und das Überleben steuern. Über die Lymphopoese hinaus übernimmt EBF1 durch kontextabhängige transkriptionelle Kontrolle Funktionen in der Adipogenese und der Neuroentwicklung. Eine fehlregulierte Expression oder Funktion von EBF1 wurde mit einer beeinträchtigten B‑Zell‑Entwicklung und veränderten transkriptionellen Zuständen in der Biologie hämatologischer Erkrankungen in Verbindung gebracht.

EBF1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EBF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EBF1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EBF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EBF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EBF1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EBF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EBF1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EBF1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EBF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.