DZIP3 Plasmide Double Nickase (h): sc-403972-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DZIP3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DZIP3 Double Nickase Plasmid (h) e il DZIP3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DZIP3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DZIP3 Antibody (C-1): sc-514725
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DZIP3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403972-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DZIP3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403972-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DZIP3 (DAZ interacting zinc finger protein 3) è una ligasi E3 dell’ubiquitina contenente domini a dita di zinco, implicata nel turnover proteico dipendente dall’ubiquitina e nella regolazione di reti di segnalazione che controllano la crescita cellulare e le risposte allo stress. Attraverso la sua attività di ubiquitinazione e le interazioni proteina–proteina, DZIP3 è associata alla proteostasi, alla regolazione trascrizionale e alla modulazione della dinamica delle vie di segnalazione che influenzano l’omeostasi cellulare. Un’alterazione dell’espressione o dell’attività di DZIP3 è stata riportata in studi di biologia tumorale e di altre malattie complesse, stimolando indagini meccanicistiche su come l’ubiquitinazione dipendente da DZIP3 plasmi i fenotipi a valle. L’analisi funzionale di DZIP3 supporta la ricerca sul crosstalk tra vie, sulla segnalazione dipendente dal contesto e sulle relazioni genotipo–fenotipo in sistemi cellulari umani.
DZIP3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DZIP3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DZIP3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DZIP3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DZIP3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.