Plasmide Double Nickase (h) dystrophin: sc-400657-NIC

DMD code la dystrophine, une grande protéine du cytosquelette qui ancre le réseau d’actine au complexe dystrophine–glycoprotéines au niveau du sarcolemme, stabilisant les fibres musculaires lors de la contraction. Par son rôle de liaison entre le cytosquelette intracellulaire et la matrice extracellulaire, la dystrophine contribue à l’intégrité membranaire, à la mécanotransduction et à l’organisation des costamères dans les muscles squelettique et cardiaque. La perte ou la diminution de la dystrophine perturbe ces interactions structurelles et de signalisation, modifiant la régulation du calcium, la signalisation inflammatoire et les programmes de régénération musculaire. Le dysfonctionnement de DMD est fortement associé aux dystrophies musculaires liées à l’X, faisant de la dystrophine un nœud central pour l’étude des mécanismes de dégénérescence musculaire et des relations génotype–phénotype dans des modèles humains.

dystrophin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DMD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DMD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DMD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DMD.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.