Plásmido Doble Nickase (m) Dynactin 5: sc-425606-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Dynactin 5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Dynactin 5 (m) y el plásmido de doble nickasa Dynactin 5 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Dctn5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Dynactin 5 Anticuerpo (D-9): sc-518204
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Dynactin 5 | sc-425606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Dynactin 5 | sc-425606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dctn5 codifica la dinactina 5, una subunidad del complejo dinactina que coopera con la dineína citoplasmática para sostener el transporte retrógrado basado en microtúbulos. Mediante la regulación de la interacción con adaptadores de carga y de la actividad motora procesiva, la dinactina 5 contribuye al tráfico de vesículas y orgánulos, a la dinámica endosoma–lisosoma y al posicionamiento del aparato de Golgi y del huso mitótico. Estas funciones sitúan a Dctn5 dentro de vías que gobiernan el transporte intracelular, la división celular y la homeostasis de neuronas y células inmunitarias, donde el tráfico a larga distancia es un factor limitante. La alteración de componentes del eje dineína–dinactina es de amplia relevancia para estudios de neurodegeneración, defectos del desarrollo y respuestas al estrés vinculadas a un transporte axonal y una proteostasis deteriorados.
Dynactin 5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dctn5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dctn5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dctn5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dctn5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.