Plasmide Double Nickase (m) Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2: sc-420081-NIC

Le gène murin Dvl2 code Dishevelled 2 (DVL2), une protéine d’échafaudage cytoplasmique qui relaie les signaux des ligands Wnt des récepteurs Frizzled vers les effecteurs en aval. DVL2 intègre les programmes transcriptionnels de la voie Wnt/β-caténine (canonique) avec les voies non canoniques de polarité planaire cellulaire et Wnt/Ca²⁺, influençant la polarité cellulaire, le remodelage du cytosquelette, la migration et l’organisation du développement. En modulant l’intensité de la signalisation, DVL2 contribue à un contrôle de la prolifération et de la différenciation dépendant du contexte, ce qui en fait une protéine largement étudiée en morphogenèse tissulaire et en biologie des cellules souches. Une dérégulation de la signalisation Wnt–Dishevelled est impliquée dans des anomalies congénitales du développement et dans des remaniements de voies de signalisation associés aux maladies, ce qui étaye les investigations mécanistiques de la régulation de cette voie dans des modèles murins.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dvl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dvl2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dvl2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dvl2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.