dUTPase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405843

Übersicht

DUT kodiert die humane dUTPase, ein zentrales Enzym des Nukleotidstoffwechsels, das dUTP zu dUMP und Pyrophosphat hydrolysiert. Dadurch hält es die intrazellulären dUTP-Spiegel niedrig und liefert Substrat für die Thymidylatbiosynthese. Indem dUTPase den Einbau von Uracil in die genomische DNA begrenzt, unterstützt sie die Replikationstreue und Genomstabilität und ist funktionell mit Basenexzisionsreparaturwegen verknüpft, die Uracil aus der DNA entfernen. Eine veränderte DUT-Aktivität kann Replikationsstress-Antworten und DNA-Schadenssignalwege modulieren – Prozesse, die bei proliferativen Erkrankungen und in Zellen unter genotoxischem Stress häufig gestört sind. Als zentraler Knotenpunkt der Pyrimidin-Homöostase wird DUT häufig im Zusammenhang mit Zellzyklusprogression, der Erhaltung mitochondrialer und nukleärer DNA sowie mit durch Nukleotid-Ungleichgewichte getriebener Mutagenese untersucht.

Das dUTPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DUT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DUT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DUT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die dUTPase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DUT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der dUTPase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DUT-Exone abzielen, die für die dUTPase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DUT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom dUTPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom dUTPase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DUT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das dUTPase HDR-Plasmid (h) und dUTPase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DUT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DUT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.