DUSP22 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-430587-ACT

Il gene murino **Dusp22** codifica la fosfatasi a doppia specificità 22 (DUSP22), una fosfatasi atipica delle MAPK che modula la segnalazione dipendente dalla fosforilazione defosforilando residui di serina/treonina e tirosina su specifici substrati. DUSP22 è stata collegata alla regolazione dell’output della via MAPK, plasmando programmi trascrizionali a valle che influenzano l’attivazione delle cellule immunitarie, le risposte allo stress e la differenziazione. Regolando ampiezza e durata dei segnali guidati dalle chinasi, DUSP22 può incidere su processi quali segnalazione citochinica, apoptosi e omeostasi cellulare. Un’alterata attività fosfatasica all’interno delle reti regolate dalle MAPK è rilevante per fenotipi infiammatori e contesti di segnalazione proliferativa, supportando studi meccanicistici del controllo delle vie di segnalazione in modelli murini.

DUSP22 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Dusp22 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DUSP22 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Dusp22 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Dusp22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DUSP22. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Dusp22 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DUSP22 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DUSP22 nelle cellule tumorali con espressione di Dusp22 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.