Plásmido CRISPR de Activación (m) DUSP22: sc-430587-ACT

El gen **Dusp22** de ratón codifica la **fosfatasa de doble especificidad 22 (DUSP22)**, una fosfatasa atípica de MAPK que modula la señalización dependiente de la fosforilación al desfosforilar residuos de serina/treonina y de tirosina en sustratos seleccionados. DUSP22 se ha asociado con la regulación del output de la vía MAPK, moldeando programas transcripcionales aguas abajo que influyen en la activación de células inmunitarias, las respuestas al estrés y la diferenciación. Al ajustar la amplitud y la duración de las señales impulsadas por quinasas, DUSP22 puede afectar procesos como la señalización de citocinas, la apoptosis y la homeostasis celular. La alteración de la actividad fosfatasa dentro de redes reguladas por MAPK es relevante para fenotipos inflamatorios y contextos de señalización proliferativa, lo que respalda estudios mecanísticos del control de estas vías en modelos murinos.

DUSP22 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Dusp22 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DUSP22 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Dusp22 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Dusp22, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DUSP22. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Dusp22 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DUSP22 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DUSP22 en células tumorales con expresión de Dusp22 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.