Plasmide CRISPR d'Activation (h) dsg1: sc-401442-ACT

DSG1 code la desmogléine‑1, une cadhérine desmosomale dépendante du calcium qui assure une forte adhérence cellule‑cellule dans les épithéliums stratifiés et contribue au maintien de l’intégrité de la barrière épidermique. DSG1 participe à l’assemblage des desmosomes et à l’ancrage des filaments intermédiaires, coordonnant la cohésion tissulaire avec les programmes de différenciation des kératinocytes. Au-delà de ses rôles structurels, les complexes d’adhérence associés à DSG1 interagissent avec des voies de signalisation qui influencent l’homéostasie épidermique et les réponses au stress. Une expression ou une fonction altérée de DSG1 a été associée à des phénotypes de cloquage cutané et d’inflammation, et ce gène est fréquemment étudié dans des modèles de fragilité épithéliale et de différenciation dérégulée.

dsg1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DSG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

dsg1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DSG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DSG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de dsg1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DSG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de dsg1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie dsg1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DSG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.