Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DSCR 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402694-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DSCR 1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DSCR 1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DSCR 1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RCAN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DSCR 1: sc-377507
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DSCR 1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402694-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DSCR 1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402694-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RCAN1 kodiert DSCR1 (Down-Syndrom-Critical-Region-Protein 1), einen endogenen Inhibitor und Rückkopplungsregulator der calcium-/calmodulinabhängigen Phosphatase Calcineurin (PPP3). Durch die Modulation der calcineurinabhängigen Dephosphorylierung und der nukleären Lokalisation von NFAT-Transkriptionsfaktoren beeinflusst DSCR1 Ca2+-responsive Genexpressionsprogramme, die zelluläre Stressantworten, Apoptose und Differenzierung steuern. RCAN1 steht außerdem mit Signalwegen des oxidativen Stresses und der mitochondrialen Homöostase in Verbindung, mit beschriebenen Auswirkungen auf die neuronale und kardiovaskuläre Biologie. Eine fehlregulierte RCAN1/DSCR1-Aktivität wurde mit veränderter NFAT-Signalübertragung in Erkrankungsbildern wie Down-Syndrom-assoziierten Phänotypen, Neurodegeneration und vaskulärer Dysfunktion in Zusammenhang gebracht, was den Einsatz in mechanistischen Signalwegstudien unterstützt.
DSCR 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RCAN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RCAN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RCAN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RCAN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.