Plasmide Double Nickase (m) DSC2: sc-420063-NIC

Le gène murin *Dsc2* code la desmocolline‑2 (DSC2), une cadhérine des desmosomes dépendante du calcium qui assure une forte adhésion cellule‑cellule dans les tissus épithéliaux et cardiaques. DSC2 coopère avec les desmogléines, la plakoglobine, les plakophilines et la desmoplakine pour relier les complexes jonctionnels aux filaments intermédiaires, soutenant ainsi l’intégrité tissulaire et la mécanotransduction. Par son rôle dans l’assemblage des desmosomes et le remodelage des jonctions, DSC2 influence la différenciation épithéliale, la fonction barrière et les réponses au stress, en interaction avec des voies du cytosquelette et de signalisation telles que la dynamique jonctionnelle régulée par la PKC et les GTPases de la famille Rho. Une expression ou une fonction dérégulée de DSC2 est associée à une adhésion altérée et à des phénotypes de fragilité tissulaire, et les perturbations des desmosomes sont pertinentes pour des modifications de la cohésion cellulaire liées à la cardiomyopathie et au cancer dans des modèles expérimentaux.

DSC2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dsc2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dsc2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dsc2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dsc2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.