DRP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400459-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DRP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DRP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DRP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DNM1L abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DRP1: sc-271583
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DRP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400459-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DRP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400459-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNM1L kodiert das dynaminverwandte Protein 1 (DRP1), eine große GTPase, die die mitochondriale Spaltung (Fission) steuert, indem sie sich an der äußeren Mitochondrienmembran assembliert und die Membranen in Zusammenarbeit mit Adapterproteinen wie FIS1, MFF und MID49/51 einschnürt. Über die Regulation der Architektur des mitochondrialen Netzwerks beeinflusst DRP1 die oxidative Phosphorylierung, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies, die Verteilung der mitochondrialen DNA sowie die Organellen-Qualitätskontrolle durch Mitophagie. DRP1-abhängige Dynamiken sind eng mit der Apoptose-Signalgebung und metabolischer Anpassung verknüpft und verbinden die DNM1L-Aktivität mit Signalwegen, die zelluläre Stressantworten und die bioenergetische Homöostase steuern. Eine dysregulierte DRP1-Funktion und mitochondriale Fragmentierung sind mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen, kardiometabolischen Funktionsstörungen und Überlebensprogrammen von Krebszellen assoziiert, was DNM1L zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien der Mitochondrienbiologie macht.
DRP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DNM1L-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DNM1L abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DNM1L-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DNM1L-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.