DRIM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409900

Descripción general

UTP20 (también conocido como DRIM) codifica un factor nucleolar necesario para la biogénesis de ribosomas, que participa en la maduración del pre‑ARNr y en el ensamblaje de la subunidad ribosomal grande 60S. Al sostener la homeostasis nucleolar y una producción eficiente de ribosomas, DRIM contribuye a la capacidad traduccional global y a la proteostasis, procesos estrechamente vinculados al crecimiento celular y a la adaptación al estrés. La alteración de la biogénesis ribosomal puede activar la señalización de estrés nucleolar y puntos de control dependientes de p53, conectando las vías asociadas a DRIM con el control de la proliferación. La regulación anómala de la producción de ribosomas se observa con frecuencia en el cáncer y en otros trastornos del crecimiento celular, lo que convierte a DRIM en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación de la traducción y de las respuestas al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DRIM (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen UTP20 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del UTP20 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de UTP20 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DRIM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en UTP20 para la investigación de la señalización de DRIM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de UTP20 críticos para la función de DRIM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de UTP20 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DRIM CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DRIM CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus UTP20. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DRIM (h) y el plásmido HDR DRIM (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología UTP20 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana UTP20 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.