Plásmido Doble Nickase (m) DR5: sc-423438-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)DR5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DR5 (m) y el plásmido de doble nickasa DR5 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Tnfrsf10b. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DR5 Anticuerpo (7F4-F8-G11): sc-517559
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) DR5 | sc-423438-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Tnfrsf10b** codifica el receptor de muerte 5 (DR5), un miembro de la superfamilia de receptores de TNF que se une a TRAIL e inicia la apoptosis extrínseca mediante la trimerización del receptor, el reclutamiento de FADD y la activación de la caspasa-8. La señalización de DR5 puede converger con la amplificación mitocondrial a través de BID y la caspasa-9, y también activar las vías de NF-κB y MAPK, que influyen en la expresión de genes inflamatorios y en las respuestas al estrés. La regulación de la expresión y el tráfico de DR5 determina la sensibilidad a la señalización por receptores de muerte y contribuye a las decisiones de destino celular durante la vigilancia inmunitaria y la homeostasis tisular. Las alteraciones en la actividad de la vía de DR5 se estudian con frecuencia en el contexto de la biología tumoral, la regulación inmunitaria y la resistencia a señales apoptóticas en modelos de enfermedad.
DR5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tnfrsf10b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tnfrsf10b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tnfrsf10b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tnfrsf10b alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.