Plasmide Double Nickase (h) DPYD: sc-403396-NIC

DPYD code la dihydropyrimidine déshydrogénase, l’enzyme limitante de la vitesse de la dégradation des pyrimidines, qui convertit l’uracile et la thymine en dihydrouracile et dihydrothymine, reliant ainsi le renouvellement des nucléotides au métabolisme cellulaire de l’azote et du carbone. En tant qu’oxydoréductase majeure dépendante du NADPH, l’activité de DPYD influence l’homéostasie des pools de nucléotides et peut interagir avec l’équilibre rédox et les besoins bioénergétiques mitochondriaux des cellules en prolifération. Les variations génétiques ou une expression modifiée de DPYD sont associées à des erreurs innées du métabolisme des pyrimidines et ont été étudiées dans le cadre des différences interindividuelles de métabolisme des médicaments fluoropyrimidiniques et du risque de toxicité. DPYD constitue également un nœud utile pour étudier le remodelage métabolique, les réponses au stress liées à un déséquilibre des nucléotides et les interactions entre voies influençant la synthèse de l’ARN et de l’ADN.

DPYD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DPYD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DPYD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DPYD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DPYD.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.