Plasmide Double Nickase (h) DPPX: sc-403662-NIC

DPP6 code la protéine de type dipeptidyl peptidase 6 (DPPX), un membre de la famille des DPP dépourvu d’activité enzymatique, qui agit comme sous-unité auxiliaire des canaux potassiques voltage‑dépendants, en particulier des complexes Kv4. En modulant la cinétique d’ouverture/fermeture des canaux, leur trafic et leur expression à la surface cellulaire, DPPX façonne l’excitabilité dendritique, la repolarisation du potentiel d’action et l’intégration synaptique dans les neurones, l’inscrivant dans la signalisation dépendante de l’activité et l’homéostasie des circuits neuronaux. Une expression altérée de DPP6/DPPX ou des variations génétiques ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques ainsi qu’à une susceptibilité à des troubles liés à l’hyperexcitabilité neuronale, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la régulation des canaux ioniques et du fonctionnement cérébral.

DPPX Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DPP6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DPP6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DPP6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DPP6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.