Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
DPH2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409607
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- DPH2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico DPH2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DPH2 Anticuerpo (6E7): sc-101200
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
DPH2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-409607 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DPH2 codifica una enzima esencial de la vía de biosíntesis de la diftamida, que modifica una histidina conservada en el factor de elongación de la traducción eucariota 2 (EEF2). Esta modificación postraduccional favorece la fidelidad de la traducción e influye en las respuestas celulares al estrés dirigido a los ribosomas, vinculando la actividad de DPH2 con el control central de la síntesis proteica. La alteración de componentes de la vía de la diftamida puede modificar la proteostasis y la señalización de estrés, lo que convierte a DPH2 en un nodo útil para estudiar mecanismos de regulación de la traducción. Dado que la diftamida de EEF2 también determina la sensibilidad a ciertas toxinas bacterianas, DPH2 ofrece un punto de entrada abordable para investigar interacciones huésped–patógeno y la biología de toxinas en células humanas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO DPH2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DPH2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DPH2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DPH2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DPH2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DPH2 para la investigación de la señalización de DPH2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DPH2 críticos para la función de DPH2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DPH2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido DPH2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DPH2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DPH2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DPH2 (h) y el plásmido HDR DPH2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DPH2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DPH2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.