DPF1 Double Nickase Plasmid (h): sc-409539-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DPF1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DPF1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DPF1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DPF1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DPF1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-409539-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DPF1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409539-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DPF1 (double PHD fingers 1; auch bekannt als BAF45B) kodiert eine chromatinassoziierte Untereinheit der SWI/SNF-(BAF)-Remodeling-Komplexe, die Histonmarkierungen über ihre PHD-Finger-Domänen erkennt und dadurch die Zugänglichkeit von Nukleosomen moduliert. Über die Regulation der Aktivität von Enhancern und Promotoren trägt DPF1 zu Transkriptionsprogrammen bei, die mit der neuronalen Entwicklung, der Linienfestlegung und stimulusabhängiger Genexpression verknüpft sind. Veränderungen der Zusammensetzung des BAF-Komplexes und des Chromatin-Remodelings werden breit mit gestörter Differenzierung und onkogenen Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, was DPF1 zu einem geeigneten Ziel für die Untersuchung der epigenetischen Kontrolle des Zellschicksals und kontextabhängiger Transkription macht. In humanen Zellen unterstützen DPF1-fokussierte Experimente die mechanistische Untersuchung von Signalwegen, die mit Chromatin-Remodeling gekoppelt sind und Genexpressionsnetzwerke prägen, die für Entwicklung und krankheitsassoziierte Umprogrammierung der Transkription relevant sind.
DPF1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DPF1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DPF1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DPF1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DPF1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.