DOT1L1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403286-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DOT1L1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DOT1L1 Double Nickase Plasmid (h) e il DOT1L1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DOT1L. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DOT1L1 Antibody (E-5): sc-374317
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DOT1L1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403286-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DOT1L1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403286-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DOT1L codifica DOT1L1, una metiltransferasi della lisina che catalizza la mono-, di- e tri-metilazione della lisina 79 dell’istone H3 (H3K79), un marcatore della cromatina associato alla trascrizione attiva. Attraverso la regolazione di programmi di espressione genica, DOT1L influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, la differenziazione ematopoietica e le reti trascrizionali dello sviluppo. La metilazione di H3K79 dipendente da DOT1L interagisce con il controllo epigenetico dell’elongazione dell’RNA polimerasi II e dell’accessibilità della cromatina, contribuendo a definire stati trascrizionali specifici di linea cellulare. Un’attività di DOT1L deregolata e pattern alterati di metilazione di H3K79 sono implicati in programmi trascrizionali oncogeni, inclusi quelli associati alle leucemie con riarrangiamenti di MLL, a sostegno della sua rilevanza nella ricerca in epigenetica e biologia del cancro.
DOT1L1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DOT1L nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DOT1L. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DOT1L. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DOT1L interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.