Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
DnaJA4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406743
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DnaJA4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico DnaJA4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DnaJA4 Antibody (LL2): sc-100714
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DnaJA4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406743 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DNAJA4 codifica DnaJA4, un membro della famiglia dei co-chaperoni Hsp40 (DnaJ) che si lega alle proteine “client” non correttamente ripiegate e stimola l’attività ATPasica di Hsp70 per favorire il corretto ripiegamento, il ripiegamento (refolding) e lo smistamento delle proteine mal ripiegate. Attraverso questi processi di controllo qualità guidati dai chaperoni, DnaJA4 contribuisce alle reti di proteostasi che intersecano le risposte cellulari allo stress e le vie di turnover/degradazione proteica. Un’attività chaperonica disregolata può influenzare la stabilità e la funzione delle proteine di segnalazione, con effetti sulle vie che governano sopravvivenza cellulare, differenziamento e adattamento allo stress. Un’alterata capacità di proteostasi è ampiamente rilevante per la biologia delle malattie, anche in contesti in cui ripiegamento aberrante, aggregazione o segnalazione da stress sostengono fenotipi patologici.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJA4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DNAJA4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DNAJA4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DNAJA4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DnaJA4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DNAJA4 per lo studio della segnalazione di DnaJA4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DNAJA4 critici per la funzione di DnaJA4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DNAJA4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal DnaJA4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DnaJA4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DNAJA4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal DnaJA4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DnaJA4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DNAJA4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DNAJA4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.