DNA pol θ Plasmide Double Nickase (h): sc-407414-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNA pol θ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNA pol θ Double Nickase Plasmid (h) e il DNA pol θ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira POLQ. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNA pol θ Plasmide Double Nickase (h) | sc-407414-NIC | 20 µg | $410.00 |
POLQ codifica la DNA polimerasi theta (Pol θ), una polimerasi della famiglia A a bassa fedeltà che possiede anche un’attività di tipo elicasi e funge da mediatore centrale della giunzione delle estremità mediata da microomologie (MMEJ), detta anche giunzione delle estremità mediata da theta. Pol θ agisce in corrispondenza delle rotture a doppio filamento del DNA e delle forcelle di replicazione bloccate, promuovendo la ricongiunzione delle estremità tramite brevi microomologie e influenzando così la stabilità del genoma, la tolleranza allo stress replicativo e le firme mutazionali. Questa via interagisce con la giunzione delle estremità non omologhe classica e con la ricombinazione omologa, orientando la scelta della via di riparazione in condizioni di resezione delle estremità del DNA compromessa o di capacità di HR ridotta. Alterazioni dell’attività e dell’espressione di POLQ sono spesso studiate nel contesto di riarrangiamenti cromosomici e ipermutagenesi associati alla biologia dei tumori e a stati di difetto nei meccanismi di riparazione del DNA.
DNA pol θ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POLQ nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POLQ. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POLQ. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POLQ interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.