Plasmide Double Nickase (h) DNA pol θ: sc-407414-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DNA pol θ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DNA pol θ Double Nickase (h) et le plasmide DNA pol θ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant POLQ. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DNA pol θ | sc-407414-NIC | 20 µg | $410.00 |
POLQ code l’ADN polymérase thêta (Pol θ), une polymérase de la famille A à forte propension aux erreurs, qui possède également une activité de type hélicase et joue un rôle central de médiateur de la jonction d’extrémités médiée par microhomologie (MMEJ), également appelée jonction d’extrémités médiée par thêta. Pol θ intervient au niveau des cassures double brin de l’ADN et des fourches de réplication bloquées, en favorisant la jonction d’extrémités via de courtes microhomologies, influençant ainsi la stabilité du génome, la tolérance au stress réplicatif et les signatures mutationnelles. Cette voie s’articule avec la jonction d’extrémités non homologue classique et la recombinaison homologue, et contribue à déterminer le choix de la voie de réparation lorsque la résection des extrémités de l’ADN ou la capacité de la recombinaison homologue est compromise. Les altérations d’activité et d’expression de POLQ sont fréquemment étudiées dans le contexte des réarrangements chromosomiques et de l’hypermutagenèse associés à la biologie des cancers et aux états caractérisés par des défauts de réparation de l’ADN.
DNA pol θ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POLQ dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POLQ. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POLQ. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POLQ.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.