Partículas Lentivirales de Activación (m) DNA pol γ: sc-422341-LAC

El Polg de ratón codifica la ADN polimerasa gamma, la única polimerasa replicativa del ADN mitocondrial, y sostiene la replicación, la reparación y el mantenimiento de la integridad del genoma mtDNA dentro de las mitocondrias. La ADN pol gamma funciona junto con su subunidad accesoria para garantizar una síntesis procesiva y la corrección de pruebas, vinculando la actividad de Polg con la capacidad de fosforilación oxidativa y la biogénesis mitocondrial. La alteración de la función de POLG se asocia con depleción de mtDNA o con deleciones múltiples, deterioro de la función de la cadena respiratoria y respuestas de estrés celular que afectan a tejidos con alta demanda energética. Como nodo central de la estabilidad del genoma mitocondrial, Polg se estudia ampliamente en vías que conectan el metabolismo de nucleótidos, el estrés de replicación y la disfunción mitocondrial, relevantes para modelos de neurodegeneración, miopatía y envejecimiento.

Las partículas de activación lentiviral DNA pol γ (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Polg en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DNA pol γ (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Polg, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DNA pol γ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Polg y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.