Plásmido Doble Nickase (h) DNA pol β: sc-402861-NIC

POLB codifica la ADN polimerasa beta (ADN pol β), una enzima clave en la vía de reparación por escisión de bases (BER) que rellena huecos de un solo nucleótido y procesa intermediarios de 5′-desoxirribosa fosfato durante la síntesis de reparación. Mediante su acción coordinada con XRCC1, la ADN ligasa III y las ADN glicosilasas, la ADN pol β ayuda a mantener la integridad del genoma tras daño oxidativo, alquilación y la pérdida espontánea de bases. Las alteraciones en la actividad o la expresión de POLB se han asociado con un aumento de la mutagénesis y la inestabilidad cromosómica, vinculando esta vía con mecanismos que contribuyen a la biología del cáncer y al deterioro genómico asociado al envejecimiento. Como factor central de la BER, la ADN pol β se estudia con frecuencia por su impacto en la señalización del daño en el ADN, las respuestas al estrés replicativo y la sensibilidad celular a agentes genotóxicos.

DNA pol β El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POLB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POLB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POLB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POLB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.