DNA pol β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422336
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- DNA pol β Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im DNA pol β-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DNA pol β: sc-376581
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DNA pol β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422336 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Polb kodiert die DNA-Polymerase β, ein zentrales Enzym des Base-Excision-Repair( BER)-Reparaturwegs (BER), das kurze DNA-Lücken nach der Entfernung geschädigter Basen auffüllt und 5′-Desoxyribosephosphat-Zwischenprodukte verarbeitet. Durch die Zusammenarbeit mit XRCC1, DNA-Ligase III und weiteren BER-Faktoren trägt die DNA-Polymerase β zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität bei und begrenzt die Anreicherung oxidativer sowie alkylierungsinduzierter Läsionen. Eine Störung oder Fehlregulation von BER-Komponenten, einschließlich der Polymerase β, ist mit einer erhöhten Mutationslast, beeinträchtigter DNA-Schadenssignalgebung und veränderten zellulären Stressantworten verbunden. Diese Funktionen machen Polb zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung der DNA-Reparaturkapazität, der Genotoxizitätssensitivität und von Mechanismen, die Reparaturdefekte mit krankheitsassoziierter genomischer Instabilität verknüpfen.
Das DNA pol β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Polb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Polb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Polb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DNA pol β-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Polb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DNA pol β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Polb-Exone abzielen, die für die DNA pol β-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Polb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom DNA pol β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DNA pol β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Polb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DNA pol β HDR-Plasmid (m) und DNA pol β HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Polb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Polb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.