DNA pol β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422336

Panoramica

Polb codifica la DNA polimerasi β, un enzima centrale della via di riparo per escissione di basi (BER) che riempie brevi gap nel DNA dopo la rimozione di basi danneggiate ed elabora intermedi 5′-desossiribosio fosfato. Coordinandosi con XRCC1, la DNA ligasi III e altri fattori del BER, la DNA polimerasi β contribuisce a mantenere la stabilità del genoma e a limitare l’accumulo di lesioni indotte da ossidazione e alchilazione. L’alterazione o la disregolazione dei componenti del BER, inclusa la polimerasi β, è associata a un aumento del carico mutazionale, a una compromissione della segnalazione del danno al DNA e a risposte cellulari allo stress modificate. Queste funzioni rendono Polb un bersaglio rilevante per studiare la capacità di riparo del DNA, la sensibilità ai genotossici e i meccanismi che collegano i difetti di riparo all’instabilità genomica associata a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol β (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Polb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Polb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Polb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DNA pol β.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Polb per lo studio della segnalazione di DNA pol β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Polb critici per la funzione di DNA pol β
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Polb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DNA pol β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DNA pol β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Polb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DNA pol β Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DNA pol β (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Polb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Polb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.