DMRT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424507

Descripción general

Dmrt1 codifica DMRT1, un factor de transcripción conservado que contiene un dominio DM de unión al ADN y que regula los programas de determinación y diferenciación sexual en la gónada del ratón. DMRT1 es esencial para el mantenimiento posnatal del testículo al promover la identidad de las células de Sertoli, coordinar el desarrollo de las células germinales y reprimir la activación inapropiada de vías ováricas, incluida la antagonización de redes impulsadas por FOXL2. Su actividad se integra con el control transcripcional y basado en la cromatina de la meiosis, la diferenciación de las espermatogonias y la señalización entre células somáticas y de la línea germinal dentro del epitelio seminífero. La alteración o desregulación de los programas asociados a DMRT1 se vincula con trastornos del desarrollo sexual, espermatogénesis deficiente y disgenesia gonadal, lo que lo convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos de la biología reproductiva.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DMRT1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dmrt1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dmrt1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dmrt1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DMRT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dmrt1 para la investigación de la señalización de DMRT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dmrt1 críticos para la función de DMRT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dmrt1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DMRT1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DMRT1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dmrt1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DMRT1 (m) y el plásmido HDR DMRT1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dmrt1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dmrt1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.