Dmp1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402941-ACT

Das humane DMTF1 kodiert den Cyclin‑D‑bindenden Transkriptionsfaktor Dmp1, einen mit Tumorsuppression assoziierten Regulator des Zellzyklus‑Fortschritts und der Differenzierung. Dmp1 verknüpft mitogene Signale mit der transkriptionellen Kontrolle von Checkpoint‑Signalwegen, insbesondere durch Aktivierung der ARF–MDM2–TP53‑Achse sowie durch Modulation RB/E2F‑abhängiger Programme. Indem DMTF1 Seneszenz, Apoptose und die Begrenzung der Proliferation beeinflusst, trägt es zur Aufrechterhaltung der genomischen Stabilität als Antwort auf onkogenes Signaling bei. Eine veränderte Expression oder Funktion von DMTF1 wurde in mehreren krebsrelevanten Kontexten mit einer dysregulierten Wachstumskontrolle in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Stressantworten und Zellschicksalsentscheidungen macht.

Dmp1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DMTF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Dmp1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DMTF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DMTF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Dmp1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DMTF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Dmp1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Dmp1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DMTF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.