Plásmido CRISPR de Activación (h) DMP-1: sc-402197-ACT

DMP1 codifica la fosfoproteína ácida 1 de la matriz dentinaria (DMP-1), una fosfoproteína de la matriz extracelular que regula el depósito de minerales y la homeostasis del fosfato durante el desarrollo esquelético y dental. DMP-1 se procesa en fragmentos funcionales que influyen en la maduración de los osteocitos, la dentinogénesis y la organización de la hidroxiapatita mediante interacciones con calcio/fosfato y con componentes de la matriz. En el hueso, DMP-1 se asocia con redes de señalización impulsadas por osteocitos que acoplan la mineralización de la matriz con vías reguladoras del fosfato, incluida la modulación de procesos relacionados con FGF23. La alteración de la expresión o la función de DMP1 se vincula con trastornos de la densidad mineral ósea y de la formación de dentina, lo que respalda su relevancia en estudios de la biología de la mineralización y de fenotipos esqueléticos hereditarios.

DMP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DMP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DMP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DMP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DMP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DMP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DMP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DMP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DMP-1 en células tumorales con expresión de DMP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.