DMP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402197-ACT

DMP1 codifica la dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1), una fosfoproteina della matrice extracellulare che regola la deposizione dei minerali e l’omeostasi del fosfato durante lo sviluppo scheletrico e dentale. DMP-1 viene processata in frammenti funzionali che influenzano la maturazione degli osteociti, la dentinogenesi e l’organizzazione dell’idrossiapatite attraverso interazioni con calcio/fosfato e con componenti della matrice. Nell’osso, DMP-1 è collegata a reti di segnalazione guidate dagli osteociti che accoppiano la mineralizzazione della matrice a vie di regolazione del fosfato, inclusa la modulazione di processi associati a FGF23. Un’alterata espressione o funzione di DMP1 è associata a disturbi della densità minerale ossea e della formazione della dentina, a supporto della sua rilevanza negli studi sulla biologia della mineralizzazione e sui fenotipi scheletrici ereditari.

DMP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DMP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DMP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DMP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DMP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DMP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DMP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DMP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DMP-1 nelle cellule tumorali con espressione di DMP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.