Dkk-3 Plasmide Double Nickase (m): sc-424494-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dkk-3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Dkk-3 Double Nickase Plasmid (m) e il Dkk-3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dkk3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dkk-3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424494-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dkk-3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424494-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina 3 correlata a Dickkopf (Dkk-3) è una glicoproteina secreta che modula la segnalazione extracellulare, con effetti dipendenti dal contesto sull’attività di Wnt/β-catenina e un più ampio crosstalk con vie che governano le decisioni sul destino cellulare. Nei tessuti murini, l’espressione di Dkk3 è stata associata alla regolazione di proliferazione, differenziamento e rimodellamento tissutale, inclusi effetti sulle interazioni stroma–epitelio e sui microambienti immunitari. Livelli alterati di Dkk3 sono stati riportati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, come la biologia tumorale, la fibrosi e il rimodellamento metabolico o cardiovascolare, in cui cambiamenti nei programmi trascrizionali associati a Wnt possono influenzare le transizioni di stato cellulare. Queste caratteristiche rendono Dkk3 un nodo utile per analizzare la segnalazione paracrina e le dinamiche delle vie in modelli meccanicistici.
Dkk-3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dkk3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dkk3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dkk3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dkk3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.