DIO1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405162-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DIO1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DIO1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DIO1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DIO1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DIO1: sc-515198
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DIO1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405162-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DIO1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405162-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DIO1 kodiert die Typ‑I‑Iodthyronin‑Deiodinase, ein Selenoenzym, das die Deiodierung von Schilddrüsenhormonen am äußeren und inneren Ring katalysiert, indem es Thyroxin (T4) in das bioaktive Trijodthyronin (T3) umwandelt und so die lokale Verfügbarkeit von Schilddrüsenhormonen reguliert. Diese Aktivität unterstützt die endokrine Homöostase und prägt transkriptionelle Programme, die durch Schilddrüsenhormonrezeptoren gesteuert werden; dadurch ist die DIO1‑Funktion mit Stoffwechselrate, Lipid‑ und Kohlenhydratstoffwechsel sowie redoxsensitiven zellulären Prozessen verknüpft. Die DIO1‑Expression ist insbesondere in Leber und Niere ausgeprägt und wird durch den Ernährungszustand sowie hormonelle Signale moduliert, die die Dynamik der Schilddrüsenhormonsignalisierung beeinflussen. Eine fehlregulierte Deiodinase‑Aktivität ist mit veränderten Schilddrüsenhormonprofilen assoziiert, wie sie bei Schilddrüsenerkrankungen und systemischen Stoffwechselstörungen beobachtet werden, wodurch DIO1 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien hormonabhängiger Signalwege darstellt.
DIO1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DIO1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DIO1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DIO1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DIO1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.