DIEXF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411950-ACT

Das humane DIEXF kodiert einen konservierten RNA-Verarbeitungsfaktor, der an der Ribosomenbiogenese und am RNA-Stoffwechsel beteiligt ist. Berichtet wurden Funktionen bei der Reifung von Prä‑rRNA sowie in der Nucleolus-Funktion, die die Proteinsynthese und Zellproliferation unterstützen. Die DIEXF-Aktivität greift in grundlegende Programme der Genexpression ein, indem sie die Bildung und Qualitätskontrolle ribosomaler Untereinheiten beeinflusst, und verknüpft DIEXF damit mit Zellwachstum, Stressanpassung und Genomstabilität. Eine veränderte Regulation von Komponenten der Ribosomenbiogenese wird häufig in proliferativen und stressassoziierten Zuständen beobachtet, was DIEXF zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um Signalwege zu untersuchen, die die Homöostase des Nucleolus mit Zellzykluskontrolle und Zellviabilität koppeln. In der biomedizinischen Forschung ist DIEXF daher relevant, um zu analysieren, wie Störungen der RNA-Prozessierung und der Translationskapazität zelluläre Phänotypen umformen.

DIEXF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DIEXF-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DIEXF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DIEXF-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DIEXF-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DIEXF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DIEXF-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DIEXF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DIEXF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DIEXF-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.