Plasmide Double Nickase (h) DHODH: sc-402983-NIC

La DHODH humaine (dihydroorotate déshydrogénase) est une flavoprotéine de la membrane interne mitochondriale qui catalyse l’oxydation limitante de la dihydroorotate en orotate lors de la biosynthèse de novo des pyrimidines, en couplant la production de nucléotides à la chaîne respiratoire via l’ubiquinone. En contrôlant la disponibilité en UMP, la DHODH influence la synthèse de l’ADN/ARN, la progression de la phase S et la capacité proliférative, et elle contribue au reprogrammation métabolique en situation de stress nutritionnel. L’activité de la DHODH relie la bioénergétique mitochondriale à l’homéostasie des nucléotides et peut moduler l’équilibre rédox par transfert d’électrons vers la chaîne de transport d’électrons. Une dérégulation du métabolisme des pyrimidines et une dépendance modifiée à la DHODH ont été mises en cause dans des contextes de division cellulaire rapide et de dysfonction mitochondriale, faisant de la DHODH un nœud d’intérêt pour l’étude des vulnérabilités métaboliques et de la régulation du cycle cellulaire.

DHODH Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DHODH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DHODH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DHODH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DHODH.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.