DGK-ζ Double Nickase Plasmid (h): sc-403843-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DGK-ζ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DGK-ζ Double-Nickase-Plasmid (h) und DGK-ζ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DGKZ abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DGK-ζ Double Nickase Plasmid (h) | sc-403843-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DGK-ζ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403843-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die Diacylglycerol-Kinase Zeta (DGK-ζ), kodiert durch das menschliche DGKZ-Gen, phosphoryliert Diacylglycerol zu Phosphatidsäure und prägt damit Stärke und Dauer der Signalübertragung durch lipidische Second Messenger. Durch die Kontrolle der Verfügbarkeit von Diacylglycerol moduliert DGK-ζ nachgeschaltete Signalwege, darunter PKC-/RasGRP-abhängige Signalgebung, und greift in die Ausgänge der PI3K–AKT- und MAPK-Netzwerke ein, die Proliferation, Differenzierung, Migration und Überleben beeinflussen. DGK-ζ wurde zudem mit Zytoskelett-Umbau und Membrantransport in Verbindung gebracht, vermittelt durch die lokale Regulation von Phosphatidsäure-Pools in Signal-Mikrodomänen. Eine dysregulierte DGKZ-Expression oder -Aktivität wurde mit veränderter Signalgebung in Immunzellen assoziiert und in Kontexten wie Entzündung sowie krebsassoziiertem Rewiring von Signalnetzwerken untersucht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien der Signaltransduktion unterstreicht.
DGK-ζ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DGKZ-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DGKZ abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DGKZ-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DGKZ-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.